三孢布拉霉結合實驗

 一、實驗材料：

三孢布拉霉（產β-胡蘿卜素， + 菌）Neurospora crassa  CCTCC AF 97006

三孢布拉霉（產β-胡蘿卜素， - 菌）Neurospora crassa  CCTCC AF 96002

三孢布拉霉發酵產生β-胡蘿卜素：

三孢布拉霉正負菌混合培養會增加其β-胡蘿卜素的產量。正、負菌混合培養時屬于有性生殖，正、負菌的菌絲體互相接觸，可生成有性生殖促進劑三孢酸（在β-胡蘿卜素合成過程中存在的一種酶）。此酶主要在八氫番茄紅素之后起作用。三孢酸在培養基中能促進上述酶的大量產生，使得八氫番茄紅素大量轉化為β-胡蘿卜素。

二、實驗步驟：

 孢子懸液的制備。在無菌條件下，分別挑取斜面培養的三孢布拉霉正、負菌接種到60ml PDA固體培養基的250ml三角瓶中，在30℃恒溫培養箱中培養，待菌絲長滿后，將三角瓶置于18℃低溫下刺激2天，此時可以看到三孢布拉霉正、負菌的菌絲都生成大量孢子。加入60ml含有玻璃珠的滅菌生理鹽水，180r/min搖床振蕩處理10min。將孢子充分打散，得到孢子懸液。然后吸取1ml孢子懸液到滅菌的離心管中。血球計數板計數后，調整孢子濃度至5ⅹ103個/ml。 將正、負菌按1:2的比例接種到發酵培養基中。接種量為10%。28℃培養。每天對發酵液的生物量及產生β-胡蘿卜素進行測定。

 三、實驗結果：

結果表明7d時生物量達到最大值，培養基中的糖幾乎耗盡。發酵8dβ-胡蘿卜素產量達到最大值。

教學建議：

 最佳發酵條件為，初始pH為6.5，裝液量為90/250ml。搖床轉速為180r/min，發酵溫度28℃。

 發酵培養基，葡糖糖100g/L、酵母浸粉12g/、磷酸二氫鉀3g/L、磷酸氫二鈉3g/L、七水硫酸鎂0.5g/L。

 最佳保存條件：室溫保存，可用于一周教學實驗。