噬菌體效價實驗

一、實驗材料：

菌株λ噬菌體溶原株 ：Escherichia coli K12 WK 6 λ

λ噬菌體敏感株：Escherichia coli  C600 CR34

培養基：肉湯培養基；軟瓊脂：肉湯培養基中加入0.5%瓊脂10ml/管

培養條件： NA培養基或LB培養基，37℃

二、實驗步驟：

1.7.5ml 新鮮E.coli λ 菌液離心

2.菌沉淀用1ml無菌水懸浮

3. 菌懸液加在無菌平皿中央，開皿蓋，在安全柜的紫外燈下照射15秒（0.15mJ/cm2）

4.加入NA培養液5ml

5.37℃暗培養3小時

6.吸取以上菌液-培養液混合物，加1 - 0.5ml氯仿震蕩后離心12000rpm2分鐘

7.上清十倍稀釋至10-7

8.選擇10-5、10-6、10-7上清稀釋液100ul 與100ul受體菌（CCTCC AB 2013330）混合

9.37℃溫浴20分鐘

10.混合菌液加入到NA軟瓊脂（不燙手）中震蕩混勻倒NA平板

三、實驗結果：

1.稀釋度為10-4的平板：布滿噬斑不可數

2.稀釋度為10-5的平板：噬斑346個

3.稀釋度為10-6的平板：噬斑37個

4.稀釋度為10-7的平板：噬斑4個

 四、實驗建議：

1.噬菌體液體放置在室溫下兩周會導致數量下降一個數量級。

2.宿主菌必須是噬菌體敏感菌株CCTCC AB 2013330，教學用普通大腸菌和噬菌體溶原菌株不能產生噬菌斑。

3.瓊脂的濃度（1.5%-2.0%），過高或過低的瓊脂含量均不能達到好的效果。

4.噬菌體與細胞的比例，測定噬菌體效價應采用低感染復數。

5.指示菌密度是在平板上獲得清晰噬菌斑效果的重要因素之一，其細胞密度不宜過高。一般控制在1ⅹ107個細胞/ml為宜。

圖1. 上一排為平板背面照片，下一排為平板正面照片。