| 產品名稱 |
NCI-H82 |
| 商品貨號 |
MZ-3343 |
| 中文名稱 |
人小細胞肺癌細胞 |
| 細胞數(shù)量 |
1*10^6 |
| 組織來源 |
人 來源于轉移灶：胸腔積液 |
| 細胞形態(tài) |
上皮樣、懸浮成團 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)基 |
RPMI-1640 87%+ 優(yōu)質胎牛血清 10%+GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%+Sodium Pyruvate丙酮酸鈉1%+P/S青霉素-鏈霉素 1% |
| 傳代方法 |
1：2 |
| 細胞描述 |
原始腫瘤的形態(tài)學不符合小細胞肺癌（SCLC）的特征。該細胞系在生化和形態(tài)學上是SCLC的變種，表達神經(jīng)元特異性烯醇酶和肌酸激酶的腦同工酶。它的L-DOPA脫羧酶或蛙皮素的表達量未達到可檢測水平。該細胞產生一個異常大小的p53 mRNA（3.7 kb）。該細胞的C-myc DNA序列擴增約25倍，c-myc RNA比正常細胞增加24倍。據(jù)報道該細胞表達功能性ANP受體，但用ANP處理不會改變其生長方式。該細胞的神經(jīng)絲和波形蛋白染色呈陽性，表達v-fes，v-fms，Ha-ras，Ki-ras，N-ras和c-raf 1 mRNA。經(jīng)本庫STR檢測無誤，STR鑒定結果為： Amelogenin: X ,CSF1PO: 11,11, D13S317: 8,8, D16S539: 12,12,D5S818: 12,12, D7S820: 10,13,TH01: 9,9.3,TPOX: 11,11,vWA: 14,14 |
| 培養(yǎng)條件 |
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
| 細胞凍存 |
Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 細胞復蘇步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 細胞運輸 |
干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸（T25細胞瓶） |
