| 產(chǎn)品名稱 |
ProPakA.6 |
| 商品貨號 |
MZ-2939 |
| 中文名稱 |
人胚腎細(xì)胞 |
| 特征特性 |
roPak包裝細(xì)胞系可產(chǎn)生小鼠白血病病毒(MLV)異種顆粒(ProPak- x細(xì)胞;ATCC CRL-12007)或兩性顆粒(propaka細(xì)胞;ATCC CRL-12006和ATCC CRL-12479)。 人類胚胎腎系293基礎(chǔ)上建系，它們分泌由gag-pol和env蛋白組成的有缺陷(非傳染性)小鼠白血病病毒(MLV)顆粒。 在PA317細(xì)胞中不斷產(chǎn)生具有復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒(RCR)的載體，在以propak為基礎(chǔ)的生產(chǎn)培養(yǎng)基中從未檢測到RCR。 通過嚴(yán)格的檢測，證實了以propak為基礎(chǔ)的生產(chǎn)細(xì)胞不具有復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒(RCR)。 與pa317包裝的兩性載體相比，propak衍生的兩性載體能夠?qū)崿F(xiàn)更高的目標(biāo)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)。 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
DMEM+10%FBS+1%P/S |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復(fù)蘇細(xì)胞步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
