大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC-12(高分化)

1、細(xì)胞名稱：PC-12(高分化)；大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞

2、生長特性： ? 貼壁

3、細(xì)胞生長條件：

培養(yǎng)條件 1640+10%FBS+1%雙抗

溫度 37℃

空氣條件 5% CO2，,95% AIR

傳代方法 1:2 傳代，2~3 天換液

凍存條件 90%FBS+10%DMSO

4、背景資料：該細(xì)胞系來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤。這些細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)生長因子(NGF)受體。NGF 可誘導(dǎo)產(chǎn)生神經(jīng)表型。這些細(xì)胞不合成腎上腺

素。

二．使用方法

1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出 25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)

或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后 將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 12ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳 代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將 懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn) 入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃ 水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃， 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。