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人腦微血管內皮細胞

細胞特性

1)來源:人腦微血管內皮細胞

2)形態:內皮細胞

3)含量:>1x106 個/mL

4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到 后立即轉入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼 續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。 收到細胞后請拍照,3 天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
 
細胞用途:僅供科研使用。
 
細胞接收后的處理: 1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。 2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,酒精消毒瓶壁并將 T25 瓶置于 37℃培養 約 2-3h。 3)棄去 T25 瓶中的培養基,添加 6ml 新的完全培養基。 4)如果細胞長滿 80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養用本公司附帶的完全 培養基。
細胞培養步驟 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)準備內皮專用培養基 2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養箱濕 度為 70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
 
二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入 4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。 2.加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培養箱 中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。 3.按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘, 棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。 4.將細胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。 下面以 T25 瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶, 細胞變圓脫落后,加入 2ml 完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM 離心 4 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加 DMSO 至最終濃度為 10%。加入 DMSO 后迅速混勻,按每 1ml 的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好 標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于 1X106 個細胞凍存。 3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少 2 個小時以后轉 入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 注意事項: 1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立 即與我們聯系。 2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注 意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

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