EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞

好辦法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶

消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作。鏡下觀察：未超過(guò) 80%匯合度時(shí)，可將瓶

裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中，懸浮細(xì)胞需離心處理，加入 6ml 新鮮完全培養(yǎng)基，

放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過(guò) 80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體

操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入

5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL

培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入

6cm 皿中，加入約 6ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL

培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿

中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸

液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄

去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM 條件下離

心 8-10 分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入細(xì)胞庫(kù)推薦的無(wú)血清凍存液。

PS：若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放

到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培

養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若

密度未超過(guò) 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò) 80%，可直

接進(jìn)行傳代（方法同上）。