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人APP基因轉染CHO細胞株(7WD10)

人APP基因轉染CHO細胞株(7WD10)介紹:采用脂質體轉染的方法,穩定轉染CHO細胞野生型AβPPTS1 基因,所得細胞表達野生型AβPPTS1蛋白

人APP基因轉染CHO細胞株(7WD10)特性:
1
 來源:脂質體轉染CHO細胞

2 形態:梭形

3 含量:>1x106 /mL

4 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5 規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基后轉移至250px培養皿或者T75培養瓶中培養,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

人APP基因轉染CHO細胞株(7WD10)用途:僅供科研使用。

人APP基因轉染CHO細胞株(7WD10)培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1
 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L)90%;優質胎牛血清,10%,添加250ug/ml G418
2
 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%
3
 凍存液:90%完全培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 
細胞處理:
1
 復蘇
細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2
 
細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁
細胞,傳代可參考以下方法:
1. 
棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗
細胞1-2次。
2. 
2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察
細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 
6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 
細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3
細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。

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