人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)介紹：人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549 細胞耐藥亞株。。

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)特性：

1） 來源：肺癌

2） 形態：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml 凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm 培養皿或者T25 培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)用途：僅供科研使用。

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)培養步驟：

一．培養基及培養凍存條件準備：

注意：客戶收到細胞后按照下面的要求操作：培養瓶里面的培養液是不含藥物的。待細胞長到70-80%的匯合度時，去掉培養液，加入含500ng/ml DDP 藥物的培養液，放入培養箱，這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來，但是不要緊，通過換液可以去掉，下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了，這時可以一直用含藥培養液來消化培養細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高到800ng/ml，含藥培養液用于細胞培養都沒問題的，凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。

1）準備1640 培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091)，90%；北美胎牛血清，10%，添加800ng/ml DDP。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。