大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞(RBL-2H3)

大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞(RBL-2H3)介紹:大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞(RBL-2H3)是1978 年國立牙科研究所的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室從Wistar 大鼠保持腫瘤狀態(tài)的嗜堿性細(xì)胞中分離和克隆出來的嗜堿性白血病細(xì)胞株。這些細(xì)胞具有高親和力的IgE 受體。通過集聚這些受體或與鈣離子載體協(xié)同作用可以激活它們分泌組胺及其他遞質(zhì)。大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞(RBL-2H3)廣泛地用于研究肥大細(xì)胞FcERI 和分泌的生化途徑。RBL-2H3 細(xì)胞是研究FcERI 結(jié)構(gòu)的模型。它們廣泛地用于研究細(xì)胞分泌的不同方面，包括細(xì)胞內(nèi)鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G 蛋白的作用。雖然幾乎所有批號的FBS 都支持細(xì)胞的生長，但在某些批號中FcERI 集聚后脫粒化得更好。另一株大鼠嗜堿性細(xì)胞株(RBL，ATCC CRL-1378)不會脫粒化。

大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞(RBL-2H3)特性:

1） 來源：大鼠外周血

2） 形態(tài)：成纖維細(xì)胞

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代細(xì)胞達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞(RBL-2H3)用途：僅供科研使用。

大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞(RBL-2H3)培養(yǎng)步驟:

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備MEM 培養(yǎng)基(MEM， GIBCO，貨號41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉0.11g/L)，85%；優(yōu)質(zhì)熱滅活胎牛血清，15%，添加1% PS。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度。

3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?span lang="EN-US">細(xì)胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。