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人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞(MOLT-4)

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞(MOLT-4)介紹:人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞(MOLT-4)從一位復(fù)發(fā)病人的細(xì)胞中建立。該病人接受過(guò)多種藥物聯(lián)合前期化療。p53 基因的248 位密碼子有一個(gè)G-A 突變。P53 不表達(dá),不生成免疫球蛋白或EB病毒。

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞(MOLT-4)特性:

1) 來(lái)源:T 淋巴母細(xì)胞

2) 形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣,懸浮生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

細(xì)胞接受后的處理:

1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25 瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

3)棄去T25 瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml 本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml 明舟生物(mingzhoubio)帶的完全培養(yǎng)基。

5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞(MOLT-4)用途:僅供科研使用。

明舟生物(mingzhoubio)的人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞(MOLT-4)培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640GIBCO,貨號(hào)11875085),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度70%-80%

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL 培養(yǎng)基的15ml 離心管中混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,加入1mL 養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按12 15 的比例分到新的含8ml 養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按12 13 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5 分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO 搖勻后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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