人卵巢透明細胞癌(ES-2)

 人卵巢透明細胞癌(ES-2)介紹: 人卵巢透明細胞癌(ES-2)建自45 歲女性黑人的外科腫瘤標本。該腫瘤為低分化卵巢透明細胞

癌。 人卵巢透明細胞癌(ES-2)最初生長在軟瓊脂中。在裸鼠中成瘤。 人卵巢透明細胞癌(ES-2)對多種化療藥物包doxorubicin, cisplatin, carmustine, etoposide 和cyanomorpholinodoxorubicin(MRA-CN)表現出低到中等的耐受性。ES-2 細胞表達低水平的P 糖蛋白。

 人卵巢透明細胞癌(ES-2)特性:

1） 來源：透明細胞癌，卵巢

2） 形態：成纖維細胞

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

 人卵巢透明細胞癌(ES-2)用途：僅供科研使用。

 人卵巢透明細胞癌(ES-2)培養步驟:

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備McCoy’s 5A 培養基((McCoy’s 5A Media,SIGMA,M4892，添加NaHCO32.2g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注

意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。