1.細胞：無論你是培養(yǎng)那種細胞，來源很重要，一般自己花錢從ATCC買來的就不用說了。若是別人“惠贈”，一定要請別人惠贈代數(shù)早一些的，狀態(tài)好一些的，有些細胞拿來時狀態(tài)就很差，還有小黑點，不是迫不得已最好別用了。若細胞是自己取材，千萬注意無菌操作，取出的細胞可以用含高濃度抗生素的培養(yǎng)基洗一下，再換用實際所需的培養(yǎng)基培養(yǎng)。
2.培養(yǎng)基：DMEM主要用于貼壁細胞培養(yǎng)，1640一般用于懸浮細胞培養(yǎng)。對常規(guī)細胞我們實驗室一直按照這個原則，除非有特殊要求。但是有時候?qū)?/span>DMEM和1640各50%或按照一定比例混合，也可以達到很好的培養(yǎng)效果，原因是兩種培養(yǎng)基中的成分會互補，對一些細胞會有幫助，尤其是剛復(fù)蘇出來狀態(tài)很差的細胞。
3.血清：若細胞珍貴，實驗經(jīng)費較足，一定使用進口，我們的經(jīng)驗是Gibico和hyclone的很好，對血清非常敏感的細胞我們首選Gibco。進口血清除非作細胞因子等免疫學(xué)檢測，無需進行滅活。非重要細胞（預(yù)實驗）或一次性實驗細胞，可以考慮用國產(chǎn)血清，但國產(chǎn)血清由于太臟，建議滅活后使用，56度，30分鐘，中間注意間斷地混勻培養(yǎng)基，防止有效成分被持續(xù)高溫破壞，使用前最好還是做一下無菌實驗。使用國產(chǎn)血清，抗生素量可適當(dāng)加倍。血清一般分裝于-20度凍存，用多少拿多少，最好是4度緩慢融化，所以你要提前一天做好準(zhǔn)備。
4.胰酶：貼壁細胞培養(yǎng)一般需要胰酶消化，對某些半貼壁細胞，雖然protocol不建議用胰酶消化，但若是貼壁較牢，你硬是要用滴管吹，反而會對細胞早成更大的傷害。我們用的胰酶是用1640培養(yǎng)基配置的，濃度為0.5%，使用效果不錯。關(guān)于消化的度的問題，是一個經(jīng)驗來的，說是看到細胞變圓，大部開始脫落就可以終止了，但我覺得還是根據(jù)特定細胞來定。注意細胞消化千萬不能過，以前養(yǎng)293細胞，消化過了會產(chǎn)生纖維狀的的絲，部分細胞聚在一起很難打散。胰酶消化前，細胞最好用PBS或Hank's液（我沒用過）稍微洗滌一下就好了，這樣很容易消化。如果偷懶，不洗也行，但消化較慢，因為殘留的血清成分會有一些中和。
5.細胞活力和增殖試：現(xiàn)在大家常用的是MTT法，很經(jīng)典。但是現(xiàn)在有更簡單好用的方法，使用alamarBlue! 具體方法大家可以自己查，我知道深圳雅為生物開發(fā)公司有改產(chǎn)品，其他代理我不太清楚。該法的優(yōu)點是染色后的細胞可以繼續(xù)進行培養(yǎng)或作其他實驗，只需在檢測完更換一下培養(yǎng)基就好了。但可能實際較貴，25ml價格約1400元，一般使用量96孔板，20ul/孔。
