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原代細胞分離與培養

 原代細胞是來源于不同組織器官,胚胎及血液的新鮮樣本經特殊實驗方法處理而制備的原初培養細胞,這一過程被稱為原代細胞分離。原代細胞具有保持原有細胞的基本性質,如果是正常細胞,仍然保留二倍體數。
細胞的分離純化和細胞培養技術是細胞生物學實驗的基礎。我們通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞。原代細胞培養是指將組織從動物體內取出,經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA) 或機械方法剪碎處理,分散成單細胞,在合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖的過程。
實驗流程
原代細胞分離和培養基本步驟
1、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡。
2、原代細胞的分離
1)應用原代細胞分離試劑盒。
3、原代細胞的培養:
1)原代細胞特制培養基
2)原代細胞特制添加物
4、細胞的培養和鑒定:
原代細胞鑒定試劑盒
4、原代細胞的傳代、保存
1)傳代:依椐細胞的生長狀態,生長的細胞1213進行傳代。
2)保存:DMSO+培養液+血清
按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃ 過夜)→液氮。
5、原代細胞的復蘇
1)取出細胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。
2)吸出細胞懸液,并加10倍以上培養液。
3)用培養液適當稀釋后接種培養瓶,放入37 CO2 培養箱靜置培養。
項目周期
根據具體細胞的性質不同培養周期長短略有差異,常規參考周期為2~3周左右
交付內容
1.符合要求的原代細胞系;
2.鑒定報告;
 
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